Leica LMD6 & LMD7 Microdisección láser
Disección perfecta
LMD6/7
En general, es posible utilizar los consumibles que de los que ya se disponga en el laboratorio. Hay distintos consumibles que se presentan en este artículo de Science Lab.
Permite conseguir las mejores preparaciones posibles, porque la recogida por gravedad no supone contacto alguno y de este modo no hay contaminación, como se ha demostrado en muchas publicaciones científicas (sólo está disponible en Inglés). También excluye la contaminación cruzada porque el preparado o el carro portamuestras nunca tiene contacto directo con el dispositivo de recogida. Puede elegir el dispositivo de recogida, ya que no es necesario ningún costoso tratamiento adhesivo especial para capturar las disecciones en contra de la fuerza de la gravedad. Precisamente por acción de la gravedad, el área diseccionada cae directamente en una tapa de tubo estándar o cualquier otro recipiente de recogida. No hay pasos adicionales, permite ahorrar tiempo y permite incluso diseccionar muchas preparaciones para un experimento, ya sea colocadas en el mismo recipiente de recogida o separadas en recipientes distintos.
Desplazamos el láser, no la muestra. Se puede comparar con el proceso de recortar un trozo de papel: se van moviendo las tijeras (el láser) mientas el papel (la preparación) permanece fijo. Los dos sistemas Leica LMD ofrecen enfoque guiado del láser mediante un puente prismático y recogen la disección simplemente usando la gravedad en un recipiente estándar situado debajo de la preparación. Simple, inteligente y eficaz.
Más información en el tutorial "How to achieve fast precise cutting lines in laser microdissection".
El único límite del LMD7 está en las estructuras tridimensionales que no se pueden diseccionar y recoger con limpieza con un dispositivo de captura láser. Las preparaciones que no absorben UV y las preparaciones muy gruesas y húmedas, como los cortes de un milímetro de tejido cerebral, resultan demasiado complicadas para este sistema.
Permite realizar disecciones perfectas en cualquier tipo de preparación con independencia de su tamaño o forma. Y es posible trabajar realmente rápido con el Leica LMD7: El haz láser se mueve con rapidez y resulta incluso más eficaz con el ajuste de frecuencia de impulso. La recogida de las disecciones por gravedad es la guinda del pastel: no requiere otra manipulación mas que proceder al análisis posterior de la preparación.
El LMD7 es la mejor elección para instalaciones con varios usuarios, ya que permite ajustar el láser con facilidad para cualquier tipo de preparación y rango de aplicación, desde estructuras subcelulares como cromosomas hasta secciones de madera de varios cientos de micras de grosor.
El Leica LMD6 tiene un láser menos potente y menos controles que el Leica LMD7. Por ello es menos flexible que el Leica LMD7. Los tejidos gruesos y duros pueden suponer un problema para este sistema, es posible que no se puedan diseccionar con rapidez o incluso que la disección no sea viable. Esto depende en gran medida del grosor y del tipo de preparación. Si tiene alguna duda sobre el sistema que debe elegir para su aplicación, no dude en ponerse en contacto con nosotros (enlace al formulario de contacto).
Con el Leica LMD6 es posible realizar disecciones perfectas de tejidos blandos como el cerebral, el hepático o el renal, con independencia de su tamaño o forma. El movimiento del haz láser permite realizar cortes rápidos y la recogida de las disecciones por gravedad aumenta aún más la velocidad de aplicación ya que la preparación está lista para análisis posterior directamente tras su recogida.
La diferencia viene marcada por el láser. El láser del Leica LMD7 es más potente y permite un control más minucioso que el láser del Leica LMD6.
| LMD6 | LMD7 | |
|---|---|---|
| Long. onda | 355 nm | 349 nm |
| Frecuencia de impulso | 80 Hz | 10 - 5000 Hz |
| Longitud de impulso | < 4 ns | < 4 ns |
| Máx. energía de impulso | 70 µJ | 120 µJ |
Es necesario utilizar tinciones y fijadores especiales para proteger el contenido para su posterior análisis de biología molecular como PCR, qPCR, secuenciación, NGS, MALDI-/SELDI-TOF, etc. Los consumibles especiales con base de membrana sin cubreobjetos ofrecen resultados óptimos en la mayor parte de los casos. También es posible utilizar portaobjetos sencillos de vidrio.
Es posible diseccionar regiones de interés a partir de preparaciones. Además de para la microdisección láser, el Leica LMD6 resulta ideal para aplicaciones estándar de disección de tejidos blandos como el cerebral, el hepático o el renal, mientras que el Leica LMD7 permite diseccionar cualquier tipo de tejido con independencia de su tamaño o forma. Asimismo, los sistemas Leica LMD se pueden utilizar para cultivos de células vivas (LCC) en clonación y como herramienta de manipulación (p. ej., para manipular organismos o células vivas), preparaciones NanoSIMS o CLEM.
Es posible aplicar la LMD en una amplia variedad de muestras en distintas preparaciones: muestras nuevas, congeladas, fijas o inmunoteñidas, células vivas, preparaciones irregulares, hueso, plantas, madera, dentina y muchas más.
La LMD se utiliza en muy diversos campos de investigación. Por nombrar solo algunos: investigación neurológica, investigación sobre el cáncer, análisis de plantas, investigación forense o del clima.
La LMD se suele utilizar en:
- Genómica (DNA), transcriptómica (RNA: p. ej., mRNA, miRNA), proteómica,
- metabolómica y nuevas tecnologías de secuenciación.
- Identificación absoluta de mutaciones dentro de células de interés.
- Caracterización de perfiles de expresión genética de un tipo específico de célula dentro de un tejido.
- Identificación de proteínas celulares durante un suceso fisiológico concreto.
- Aislamiento y recultivo de células transgénicas a partir de un cultivo.
La microdisección láser (LMD) es una técnica que permite aislar objetivos específicos y puros a partir de muestras microscópicas heterogéneas para análisis posterior de DNA, RNA y proteínas. En concreto, el láser corta la preparación por la zona marcada y el recorte se recoge en un tubo de ensayo.
