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Le pouvoir de l’analyse in vivo avec encore plus de détails

Le microscope multiphoton STELLARIS DIVE vous offre une imagerie multicouleur flexible à une profondeur supérieure à 1 mm Grâce à 4Tune, un détecteur non déscanné à réglage spectral, vous pouvez définir jusqu’à quatre bandes de détection simultanées ou un nombre illimité lorsqu’elles sont imagées séquentiellement n’importe où dans le spectre d’émission. Il vous offre la flexibilité nécessaire pour vous adapter à la combinaison de fluorophores dont vous avez besoin. Avec STELLARIS DIVE, vous pouvez réaliser des expériences multiphoton avec plus d’un milliard de combinaisons possibles de fluorophores, ce qui vous permet d’étudier des processus complexes, tels que la connectivité neuronale, la structure des organes, les interactions dynamiques ou les relations spatiales entre les cellules et les protéines de manière beaucoup plus détaillée.

Étudiez les métastases dans des échantillons vivants en utilisant quatre couleurs ou plus pour distinguer les protéines pertinentes, l’activité de l’hippocampe chez des souris éveillées ou la structure de coupes intestinales fixées épaisses avec STELLARIS DIVE !

Les dichroïques conventionnels ne sont jamais optimaux pour distinguer tous les fluorophores, mais c’est désormais possible et bien plus facile avec les détecteurs spectraux, car nous pouvons réellement optimiser les longueurs d’onde pour chaque fluorophore que vous souhaitez détecter.

Prof. Jacco van Rheenen. Netherlands Cancer Institute, Amsterdam (Pays-Bas).

Cortex cérébral de souris vivante avec neurones (GFP, en vert) et microglie (YFP, en jaune) marqués génétiquement, astrocytes marqués au sulforhodamine (en bleu), et vaisseau sanguin coloré par injection d’Alexa680-Dextran dans la veine de queue (en rouge). Le Z-stack entier mesure environ 250 x 250 x 250 µm. Échantillon fourni avec l’aimable autorisation de LMF à DZNE Bonn, Allemagne.
Cortex cérébral de souris vivante avec neurones (GFP, en vert) et microglie (YFP, en jaune) marqués génétiquement, astrocytes marqués au sulforhodamine (en bleu), et vaisseau sanguin coloré par injection d’Alexa680-Dextran dans la veine de queue (en rouge). Le Z-stack entier mesure environ 250 x 250 x 250 µm. Échantillon fourni avec l’aimable autorisation de LMF à DZNE Bonn, Allemagne.

DIVE en toute simplicité - le détecteur 4Tune

Le système de détection 4Tune non-déscanné peut être équipé de 2 à 4 détecteurs et est librement configurable avec des détecteurs hybrides (Power HyD NDD), des photomultiplicateurs (PMT) ou une combinaison des deux. Les signaux émis sont séparés par une combinaison de filtres dichroïques variables et de filtres passe-bande variables. Réglez librement votre gamme de détection sur l’ensemble du spectre visible (380 - 800 nm) !

L’interface utilisateur 4Tune vous permet d’optimiser le réglage des gammes d’émissions pour plusieurs marqueurs transgéniques par simple glisser-déposer. Grâce à sa conception claire et intuitive, il est facile à utiliser et ne nécessite qu’une formation minimale.

Avec le STELLARIS DIVE, vous êtes équipé(e) pour chaque marqueur transgénique existant ou nouvellement développé et vous êtes prêt(e) pour les nouveaux développements à venir !

Haut : système de détection non-déscanné 4Tune : 1) Dichroïque variable (VD). 2) Passe-bande variable (VB). 3) Power HyD NDD ou PMT. Bas : l’interface utilisateur intuitive 4Tune permet de régler facilement les fenêtres de détection pour toutes les couleurs de 380 à 800 nm.
Haut : système de détection non-déscanné 4Tune : 1) Dichroïque variable (VD). 2) Passe-bande variable (VB). 3) Power HyD NDD ou PMT. Bas : l’interface utilisateur intuitive 4Tune permet de régler facilement les fenêtres de détection pour toutes les couleurs de 380 à 800 nm.

Explorez de nouvelles dimensions en profondeur

Avec STELLARIS DIVE, plongez en profondeur et observez les détails les plus fins de vos échantillons. Le nouveau Vario Beam Expander (VBE) permet un réglage optimal et indépendant de tous les lasers IR d’excitation pour n’importe quel objectif.

Le VBE permet une colocalisation optimisée et un bon équilibre entre résolution et profondeur de pénétration en fonction de votre thématique de recherche.

Cortex cérébral de souris, Thy1-eYFP. Amélioration de 20 % de la profondeur de pénétration grâce au réglage Meilleure profondeur. IRAPO 25 x 1,0 W motCorr. Échantillon fourni avec l’aimable autorisation de Kevin Keppler, Light Microscope Facility, DZNE Bonn (Allemagne).
Cortex cérébral de souris, Thy1-eYFP. Amélioration de 20 % de la profondeur de pénétration grâce au réglage Meilleure profondeur. IRAPO 25 x 1,0 W motCorr. Échantillon fourni avec l’aimable autorisation de Kevin Keppler, Light Microscope Facility, DZNE Bonn (Allemagne).

Optimisez la profondeur de pénétration et la résolution avec Vario Beam Expander

Le module Vario Beam Expander (VBE) de Leicacombine un diamètre de faisceau ajustable et une divergence réglable. Vous bénéficiez d’une profondeur de pénétration maximale, d’une résolution optimale et d’une correction chromatique complète.

Diamètre de faisceau ajustable pour un meilleur équilibre entre résolution et profondeur de pénétration

STELLARIS DIVE vous permet de vous adapter aux exigences de vos échantillons. Avec Vario Beam Expander, vous avec le choix : Résolution maximale – grâce à un plan focal arrière de votre objectif entièrement illuminé – et profondeur de pénétration optimisée – grâce à un léger sous-remplissage du plan focal arrière. Le sous-remplissage du plan focal arrière de l’objectif entraîne un volume focal plus important et un trajet optique réduit, ce qui produit une excitation plus efficace.

Divergence du faisceau réglable pour une correction chromatique complète

Nos objectifs IR APO ne souffrent pas d’aberrations chromatiques dans la gamme IR. Cependant, avec STELLARIS DIVE, vous êtes prêt à utiliser un objectif adapté à l’IR avec plusieurs lasers IR : Le Vario Beam Expander peut être utilisé pour corriger les décalages chromatiques et permettre des expériences d’imagerie multicouleur complexes.

Vario Beam Expander (VBE)
Vario Beam Expander (VBE)

Élargissez le potentiel des expériences in vivo en profondeur avec l’imagerie sans marquage

Les molécules telles que le collagène et l’élastine jouent un rôle important dans des maladies comme le cancer. Notre détecteur 4Tune permet d’utiliser des signaux de génération de deuxième et troisième harmoniques qui vous permettent d’étudier ces structures importantes sans marquage.

La combinaison de DIVE et STELLARIS permet également d’utiliser des informations sur le temps de vie de fluorescence intrinsèques. Cette capacité vous permet de réaliser des expériences telles que la cartographie métabolique d’un échantillon en imagerie de temps de vie du NADH ou du FAD.

Intestin grêle de souris confetti : Collagène1 est indiqué en gris (SHG sans marquage) et les cellules souches tracées par lignée sont indiquées en cyan, vert, jaune et rouge. Les cellules souches jouent un rôle important dans la propagation du cancer au sein des organismes. Échantillon fourni avec l’aimable autorisation de Jacco van Rheenen, Netherlands Cancer Institute, Pays-Bas.
Intestin grêle de souris confetti : Collagène1 est indiqué en gris (SHG sans marquage) et les cellules souches tracées par lignée sont indiquées en cyan, vert, jaune et rouge. Les cellules souches jouent un rôle important dans la propagation du cancer au sein des organismes. Échantillon fourni avec l’aimable autorisation de Jacco van Rheenen, Netherlands Cancer Institute, Pays-Bas.

Naviguez facilement dans les tissus sans marquage supplémentaire

La navigation dans les tissus nécessite souvent des repères d’orientation pour savoir où se situent les zones d’intérêt. La propriété d’essemblage du collagène peut aider à naviguer dans les tissus et à trouver des zones d’intérêt sans avoir besoin de contre-coloration.

La plupart des tissus biologiques contiennent du collagène, qui est le principal composant des tissus conjonctifs. Par exemple, les intestins sont entourés d’une couche de collagène. Le collagène peut être facilement visualisé en microscopie multiphoton en collectant des signaux d’émission à exactement la moitié de la longueur d’onde d’excitation. Avec les fenêtres de détection flexibles de 4Tune, n’importe quelle longueur d’onde peut être utilisée pour collecter ce signal, de sorte qu’aucun marquage ou effort supplémentaire n’est nécessaire.

Une fois que la microscopiste a atteint la structure collagène, elle sait que son tissu d’intérêt (ici, les cellules souches dans les intestins) est proche.
Intestin grêle de souris confetti : SHG en gris, indique le collagène1 et les cellules souches tracées par lignée sont indiquées en cyan, vert, jaune et rouge. Échantillon fourni avec l’aimable autorisation de Jacco van Rheenen, Netherlands Cancer Institute, Pays-Bas.

Combinaison de l’imagerie multiphoton et d’informations sur le temps de vie de fluorescence pour étudier les changements métaboliques

Les changements métaboliques peuvent être un marqueur important de la santé des tissus.

STELLARIS DIVE vous offre tous les avantages de TauSense, un ensemble d’outils d’imagerie basés sur le temps de vie de fluorescence. Lorsque l’état métabolique d’une cellule change, il peut être visualisé par des changements dans le temps de vie de fluorescence de molécules, telles que le NADH. Le NADH joue un rôle essentiel dans le métabolisme du sucre et son temps de vie de fluorescence dépend de la concentration en glucose. Le temps de vie de fluorescence du NADH est modifié par un changement conformationnel qui se produit en raison de la réaction biochimique provoquant la dégradation du glucose.

Pour une analyse quantitative complète de fluorescence en temps de vie, STELLARIS DIVE peut être combiné avec FALCON (FAst Lifetime COntrast).

Autofluorescence du NADH des cellules HeLa cultivées avant et après traitement au glucose. À gauche : Gauche : résultat qualitatif avec TauContrast. À droite : Droite : analyse quantitative à l’aide de la représentation en phasor dans FALCON.
Autofluorescence du NADH des cellules HeLa cultivées avant et après traitement au glucose. À gauche : Gauche : résultat qualitatif avec TauContrast. À droite : Droite : analyse quantitative à l’aide de la représentation en phasor dans FALCON.

Ajoutez des dimensions supplémentaires à vos expériences multiphoton

L’autofluorescence est une émission naturelle de fluorescence des tissus provenant de fluorophores endogènes, tels que de petites molécules comme le NADH ou le FAD ou des structures tissulaires. Cela pose souvent problème lors de l’imagerie d’échantillons. Et si vous pouviez l’utiliser à votre avantage ?

Grâce à la combinaison de DIVE et TauSense, vous pouvez désormais utiliser la séparation basée sur le temps de vie pour obtenir des informations précieuses à partir des signaux d’autofluorescence. Cette fonctionnalité vous offre un canal supplémentaire vous permettant d’obtenir plus d’informations sur vos précieux échantillons.

Coupe de rein clarifiée avec RapidClear et imagée en microscopie multiphoton. La première image est l’intensité, la deuxième TauContrast (excitation 850 nm) et la troisième provient de quatre canaux spectraux où le rouge indique les vaisseaux sanguins (excitation AF488, 920 nm), le collagène est en gris (SHG), les cellules nerveuses sont en vert (excitation SytoxOrange, 1 040 nm) et les noyaux en bleu (excitation AF633, 1 100 nm). Avec l’aimable autorisation de SunJin Labs.
Coupe de rein clarifiée avec RapidClear et imagée en microscopie multiphoton. La première image est l’intensité, la deuxième TauContrast (excitation 850 nm) et la troisième provient de quatre canaux spectraux où le rouge indique les vaisseaux sanguins (excitation AF488, 920 nm), le collagène est en gris (SHG), les cellules nerveuses sont en vert (excitation SytoxOrange, 1 040 nm) et les noyaux en bleu (excitation AF633, 1 100 nm). Avec l’aimable autorisation de SunJin Labs.

Gagnez en productivité grâce aux capacités logicielles uniques de STELLARIS

Les systèmes multiphoton sont généralement ardus à utiliser et doivent être adaptés à chaque expérience et utilisateur. Ajoutez à cela le stress de travailler avec des animaux vivants ou des tissus fraîchement explantés et vous comprenez rapidement l’avantage d’avoir de la flexibilité lors des expériences multiphoton. STELLARIS 8 DIVE vous offre un workflow simple et sans embûches, de la préparation aux résultats finaux, grâce à l’intégration transparente des capacités multiphoton dans le logiciel STELLARIS.

  • Configuration expérimentale transparente avec ImageCompass
  • Approche intuitive pour trouver une zone d’intérêt sur votre échantillon avec LAS X Navigator
  • Augmentation de la vitesse et de la résolution grâce au Dynamic Signal Enhancement
Coupe d’intestin, 3,5 mm de diamètre, clarifiée avec RapidClear et imagée avec Navigator : N/B : SHG – collagène ; Bleu : Bleu : SytoxOrange - noyaux ; Vert : Vert : Alexa 633 - cellules nerveuses ; et Rouge : et Rouge : Alexa 488 - vaisseaux sanguins. Avec l’aimable autorisation de SunJin Labs.
Coupe d’intestin, 3,5 mm de diamètre, clarifiée avec RapidClear et imagée avec Navigator : N/B : SHG – collagène ; Bleu : Bleu : SytoxOrange - noyaux ; Vert : Vert : Alexa 633 - cellules nerveuses ; et Rouge : et Rouge : Alexa 488 - vaisseaux sanguins. Avec l’aimable autorisation de SunJin Labs.

Configuration simple et rapide d’imagerie multiphoton multicouleur avec ImageCompass

Le système multiphoton STELLARIS 8 DIVE est entièrement intégré à l’interface ImageCompass de STELLARIS, ce qui vous permet de définir facilement vos paramètres expérimentaux pour un démarrage rapide.

L’excitation et l’émission MP peuvent être définies automatiquement par le système à l’aide d’une vaste base de données de fluorophores. Elles peuvent également être définies manuellement en quelques clics. Paramètres séquentiels et visionneuse 3D rapide – l’imagerie multiphoton multicouleur n’a jamais été aussi facile.

ImageCompass offre un contrôle total du système STELLARIS 8 DIVE et permet de définir facilement des paramètres expérimentaux. 
ImageCompass offre un contrôle total du système STELLARIS 8 DIVE et permet de définir facilement des paramètres expérimentaux. 

Relevez instantanément les détails pertinents tout en gardant une vue d’ensemble de votre échantillon

LAS X Navigator est un puissant outil de navigation qui vous permet de passer rapidement de la vue image par image à un aperçu complet de votre échantillon. Grâce à l’intégration de DIVE et STELLARIS, vos expériences multiphoton peuvent devenir plus efficaces. Profitez de la possibilité de naviguer librement dans vos échantillons grands et complexes, en imagerie multicouleur en profondeur et avec des vues d’ensemble rapides, en multiposition et en mosaïque.

Une image mosaïque d’une tranche de rein, de 1 cm de long et 0,5 mm d’épaisseur, est facilement acquise et donne une image complète de la cellule nerveuse rénale et du système collagène (ici en combinaison avec TauContrast).

Coupe de rein (SunJin Labs, nettoyée avec RapidClear) imagée par LAS X Navigator et TauContrast. Une tranche entière de 10 x 7 mm et 500 µm d’épaisseur. Des temps d’arrivée plus courts en bleu représentent le collagène (signal SHG), tandis que des valeurs plus longues en vert représentent les cellules nerveuses colorées avec Alexa 633.
Coupe de rein (SunJin Labs, nettoyée avec RapidClear) imagée par LAS X Navigator et TauContrast. Une tranche entière de 10 x 7 mm et 500 µm d’épaisseur. Des temps d’arrivée plus courts en bleu représentent le collagène (signal SHG), tandis que des valeurs plus longues en vert représentent les cellules nerveuses colorées avec Alexa 633.

Dynamic Signal Enhancement :

Conservez la résolution des événements rapides in vivo

Les événements dans les échantillons vivants peuvent être rapides. Les signaux fluorescents dans les modèles animaux ont cependant tendance à être faibles.

La solution pour répondre à ces deux défis est l’amélioration dynamique du signal. Elle permet d’appliquer un moyennage pour un meilleur rapport signal-bruit et, par conséquent, une meilleure résolution, tout en s’adaptant à la dynamique de votre échantillon.

Cortex cérébral de souris vivante : neurones corticaux Thy1-eYFP en vert, signal de troisième harmonique sans marquage des cellules sanguines en noir et blanc. Excitation : 1300 nm. Échantillon fourni avec l’aimable autorisation de LMF, DZNE, Bonn, Allemagne.
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