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Acompanhar interações moleculares com FLIM-FRET

A pesquisa moderna investiga como as moléculas interagem para executar tarefas vitais. O FLIM-FRET é o padrão de excelência para explorar estas interações.

O STELLARIS FALCON define um novo padrão de velocidade para instrumentos FLIM.

Ele permite FRET em eventos celulares altamente dinâmicos. Você pode adquirir e interpretar dados FRET em seus experimentos diários.

AMPc "caged" em células HeLa interpretado pelo sensor EPAC mT2-dVenus FRET. Resposta EPAC à liberação de AMPc mediadas por UV (área central). Filme capturado a 4 fps. Tamanho da imagem: 256 x 256 pixels. Escala de barra de cores (tempo de vida): ns. Cortesia de Kees Jalink, Bram van den Broek, NKI Amsterdam.

Monitore mudanças súbitas e rápidas com biossensores

Biossensores são relatores poderosos para atividades metabólicas, mecanismos sinalizadores, mudanças de pH e do microambiente.

O STELLARIS FALCON proporciona acesso às informações contidas no tempo de vida da fluorescência, mesmo para eventos ultra-rápidos tais como a dinâmica do potencial da membrana. Essas informações complementam a aquisição de imagens espectrais da intensidade de fluorescência e modos TauSense fornecidos pelo sistema STELLARIS.

Células de mamíferos marcadas com FLIPPER TR foram imageadas durante um experimento de estresse por pressão osmótica.

Aquisição mais confiável e sensível de imagens de metabolismo

Autofluorescência pode ser um problema na aquisição de imagens convencional. O STELLARIS FALCON a transforma em informações valiosas. Agora você pode transformar a autofluorescência em um relator do estado metabólico, da diferenciação de células e do desenvolvimento de câncer.

Além disso, o STELLARIS FALCON possibilita o contraste na aquisição de imagens em tecido vivo, onde a marcação da fluorescência muitas vezes não é específica ou destrói condições fisiológicas.

Separação de fluoróforos além das opções espectrais

A marcação da fluorescência é a maneira padrão para diferenciar estruturas intracelulares. A separação espectral é muito poderosa, mas, às vezes, é limitada quando os espectros de emissão estão muito próximos.

Com o STELLARIS FALCON você pode explorar todo o potencial da aquisição de imagens do tempo de vida por fluorescência para separar múltiplas amostras fluorescentes usando adequação exponencial, adequação de padrão e e a nova análise de separação do fasor FLIM.

Imagem interativa Estruturas do citoesqueleto distinguidas pelo contraste do tempo de vida. Imunomarcação de vimentina com Alexa Fluor 555 (verde), e imunomarcação de tubulina com Alexa Fluor 546 (azul). Os fluoróforos são espectralmente muito parecidos, mas são distinguidos usando-se as informações do tempo de vida da fluorescência. Tamanho da imagem: 512 x 512 pixels.

Intensidade FLIM

STELLARIS FALCON para a aquisição de imagens do tempo de vida

O microscópio STELLARIS FALCON supera a limitação de velocidade da FLIM e abre as portas para dados rápidos de tempo de vida.

Até o momento, as informações funcionais extraídas dos dados de tempo de vida da fluorescência de processos rápidos eram difíceis de obter devido às limitações técnicas de FLIM. A velocidade de aquisição de FLIM foi pelo menos 10 vezes mais lenta do que o registro da intensidade confocal.

Usando a aquisição de imagens por contraste do tempo de vida do STELLARIS FALCON, você pode acompanhar processos dinâmicos em células na velocidade apropriada. As tarefas são possíveis graças à nova maneira de medir o tempo usando TCSPC (Time-Correlated Single Photon Counting), juntamente com algoritmos inteligentes para processamento e análise dos dados.

Nota de aplicação na revista Nature: SP8 FALCON: um novo conceito na aquisição de imagens confocais FLIM em velocidade de vídeo

Imagem de canal único de grânulos fluorescentes (magenta) em uma solução contendo Alexa Fluor 555 (verde). A separação de fluoróforos baseada no tempo de vida da fluorescência é possível em diversas velocidades, como por exemplo, 16 fps (máximo), 27 fps (sequência de vídeo, centro) e 83 fps (ultrarrápido, em baixo). A utilização das informações do tempo de vida para a separação de corantes é significantemente mais vantajosa do que a intensidade (escala de cinza). Os vídeos mostram a adequação pixel a pixel dos componentes do tempo de vida. Tamanho do quadro: 512 x 64 pixels. Barra de escala: 10 µm.

Aquisição de imagem multimodal multifuncional

A combinação do FLIM com outras modalidades nunca foi tão fácil como com o STELLARIS FALCON. Até agora, pesquisadores tiveram que lidar com cabeamentos complexos e procedimentos morosos de transferência de dados. Com o STELLARIS FALCON, você pode integrar informações de tempo de vida a seu fluxo de trabalho confocal padrão.

O STELLARIS FALCON está completamente integrado ao software de aquisição e análise de dados LAS X. Ele pode registrar a FLIM em quatro canais espectrais simultaneamente e em até 10 canais sequencialmente. O STELLARIS FALCON lhe dá acesso ao contraste do tempo de vida em conjuntos 3D, sequências de lapso de tempo e até grandes formatos em padrão de mosaico.

Com o LAS X NAVIGATOR, você pode expandir a sua área de visão em até 10.000 vezes, poupando tempo valioso na identificação de suas regiões de interesse e explorando suas amostras de uma maneira completamente inovadora.

Aquisição direta de amostras complexas. Imagem em mosaico de alta resolução de um embrião de camundongo. Cortesia: Alexandra Just, Instituto Max Planck para Biologia do Envelhecimento, Colónia, Alemanha.
Aquisição direta de amostras complexas. Imagem em mosaico de alta resolução de um embrião de camundongo. Cortesia: Alexandra Just, Instituto Max Planck para Biologia do Envelhecimento, Colónia, Alemanha.

Definição direta de tempo de vida com fasores

A análise com o STELLARIS FALCON usando fasores FLIMfornece uma visualização 2D de componentes de tempo de vida. Com fasores FLIM, você pode acompanhar mudanças microambientais, selecionar componentes para multiplexar o sinal e determinar a eficiência do FRET.

Células marcadas com Faloidina-Alexa555 e H2B mCherry. Separação usando fasores FLIM. O gráfico de fases mostra claramente duas distribuições. Cortesia: Dr. Martin Stöckl, Departamento de biologia da Universidade de Konstanz, Alemanha. 
Células marcadas com Faloidina-Alexa555 e H2B mCherry. Separação usando fasores FLIM. O gráfico de fases mostra claramente duas distribuições. Cortesia: Dr. Martin Stöckl, Departamento de biologia da Universidade de Konstanz, Alemanha. 

Os resultados de que você precisa – com um clique

O software LAS X possibilita o FLIM com um clique e a mesma filosofia da aquisição de imagens espectral rotineira.

Mesmo se usar a microscopia como uma técnica complementar, você pode encontrar os recursos essenciais e começar agora mesmo a aquisição de imagens.

Funções mais especializadas são acessíveis como fluxos de trabalho e permitem uma automação para a sua conveniência.

Filosofia de um clique para você se concentrar em sua pesquisa: STELLARIS 8 FALCON controlado pelo software LAS X.
Filosofia de um clique para você se concentrar em sua pesquisa: STELLARIS 8 FALCON controlado pelo software LAS X.
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